人Gfi1基因克隆及重组Gfi1慢病毒表达载体的构建

目的克隆人Gfi1基因的全长cDNA,构建用于真核细胞表达的含有Gfi1基因ORF区的重组慢病毒表达载体pLOX-Gfi1,为研究Gfi1基因的功能打下基础。方法应用RT-PCR从人K562细胞系中扩增出Gfi1 cDNA片段,经回收纯化与pGEM-T载体连接并转化感受态菌DH5α,通过蓝白筛选酶切鉴定出阳性菌落,质粒提取,BamHⅠ限制性内切酶酶切获得目的基因,插入慢病毒载体pLOX中并转化感受态细菌DH5α。质粒提取后进行酶切及PCR鉴定,对阳性克隆进行DNA序列分析。结果RT-PCR扩增获得含有约1.2 kb的DNA片段,酶切及PCR鉴定证实pLOX-Gfi1含有大小正确的正向Gfi1 cDNA,DNA序列分析的结果与发表于GenBank上的序列(NM005263)完全一致。结论成功克隆人Gfi1基因并构建用于真核细胞表达的重组慢病毒载体pLOX-Gfi1。