利用荧光素酶报告基因在体观察移植的人胚胎干细胞的动向

目的利用慢病毒载体携带荧光素酶报告基因并转导人胚胎干细胞,以实现在体观察移植细胞的增殖情况。方法酶切pGL3 base质粒获得荧光素酶基因序列,酶切LTBR-GIP获得载体骨架,经过酶切产物热失活、平末端处理、CIP处理、胶纯化和连接,所构建慢病毒载体命名为ULIP,包括UBC启动子和IRES连接,能同时表达荧光素酶基因和Puromycin抗性基因。以ULIP转导人胚胎干细胞H9,并以Puromycin筛选稳定转导的细胞。随后移植于BALB/c小鼠和RAG-/-γC-/-小鼠,在Xenogen IVIS(r)50成像系统进行荧光信号检测。结果稳定转导ULIP或LTBR-GIP的H9移植到BALB/c小鼠,ULIP组3d后荧光信号明显减弱,5d后基本上不能检出。而移植到RAG-/-γC-/-小鼠后,ULIP组的荧光信号在第3天稍有下降,随后荧光信号逐渐增强。LTBR-GIP-H9在移植BALB/c小鼠和RAG-/-γC-/-小鼠后均未能检测到荧光信号。结论荧光素酶报告基因可以用于观察移植细胞在体内的动向,实现实时观察移植细胞的存活情况。