携带人肝细胞生长因子腺病毒重组体的构建

目的 构建一种同时携带人肝细胞生长因子(hHGF)及绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒重组体,为hHGF的基因治疗提供实验基础.方法 对重组质粒pcDNA3-hHGF进行酶切鉴定及测序正确后,酶切获得hHGF,亚克隆至带有GFP 标记的穿梭质粒pAdTrack-CMV上.选取hHGF 正向插入的重组穿梭质粒经PmeⅠ充分线性化后,与骨架质粒pAdEasy-1 在大肠杆菌BJ5183 中同源重组,挑取阳性克隆行PCR 及酶切鉴定.重组病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后,脂质体转染HEK293 细胞进行包装并扩增获取重组病毒上清,RT-PCR 及Western Blot 方法检测hHGF 的表达.结果 目的基因的测序结果与Genebank上的hHGF序列一致.hHGF 基因插入重组腺病毒载体的预期位置,感染Ad-hHGF的HEK293细胞中可检测到hHGF mRNA 和蛋白的表达.结论 成功构建了同时携带hHGF和GFP的重组腺病毒表达载体Ad-hHGF,为进一步探讨hHGF 的生物学功能提供了实验依据.