褪黑素对阿霉素抗雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231作用的影响及其机制

目的 探讨生理浓度( 10-9mol/L)褪黑素和药理浓度(10-5 mol/L)褪黑素对阿霉素抑制雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231作用影响及其机制.方法 (1)应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测经不同浓度褪黑素孵育后阿霉素对MDA-MB-231的抑制率和IC50变化.(2)应用流式细胞学方法观察不同浓度褪黑素、阿霉素以及两药联用时对MDA-MB-231细胞周期分布和凋亡的影响.(3)应用western blot法检测不同浓度褪黑素、阿霉素单药和两药联用对MDA-MB-231细胞p53和bcl-2蛋白表达的影响.结果 (1)阿霉素对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有明显的抑制作用,且呈剂量时间依赖性.IC50值为(1.00±0.09) μg/ml,经生理浓度和药理浓度褪黑素孵育后IC50分别降为(0.85±0.06) μg/ml和(0.47±0.03) μg/ml,前者与孵育前相比未,差异无统计学意义(P＞0.05),后者相比差异无统计学意义(P＜0.01).(2)流式细胞学检测结果显示,阿霉素对细胞MDA-MB-231有凋亡促进作用,随浓度增高凋亡率未见增加(P＞0.05).生理浓度褪黑素联合阿霉素与相应浓度的阿霉素单药相比,凋亡率未见明显增加(P＞0.05).药理浓度褪黑素联合阿霉素与相应浓度阿霉素单药比较,凋亡率明显提高(P＜0.05),但联合组随着阿霉素浓度增加凋亡率并未见明显变化(P＞0.05).(3) MDA-MB-231乳腺癌细胞株中呈p53蛋白低表达、bcl-2蛋白高表达.药理浓度褪黑素可显著增高细胞p53蛋白并降低bcl-2蛋白表达(P＜0.01).药理浓度褪黑素联合不同浓度阿霉素对两蛋白表达未见显著性差异(P＞0.05)；阿霉素对两种蛋白表达未见明显影响(P＞0.05).结论 (1)生理浓度褪黑素( 10-9mol/L)对阿霉素的抗雌激素受体阴性乳腺癌细胞作用未见明显影响,药理浓度( 10-5mol/L)以上褪黑素表现出对阿霉素明显的增敏作用.(2)阿霉素较低浓度时,凋亡促进作用可能是褪黑素对其增敏机制的一部分,随着阿霉素浓度的提高,褪黑素的细胞毒增敏机制可能占主要地位.(3)药理浓度褪黑素能提高雌激素受体阴性乳腺癌细胞p53蛋白表达并降低bcl-2蛋白表达,并具有剂量依赖性.涉及p53和bcl-2的凋亡通路可能是褪黑素对阿霉素增敏机制的一部分.